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細(xì)胞劃痕實驗-第三方檢測機(jī)構(gòu)

發(fā)布時間： 2024-07-08　　點擊次數(shù)： 783次

　　細(xì)胞劃痕實驗又叫創(chuàng)傷愈合實驗，當(dāng)細(xì)胞生長至融合成單層狀態(tài)時，在細(xì)胞層上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口”，通過一段時間的培養(yǎng)，邊緣的細(xì)胞會逐漸向無細(xì)胞區(qū)域遷移，使“傷口”愈合，通過測量細(xì)胞遷移距離及速度反映細(xì)胞的遷移能力及修復(fù)能力。

　　在化妝品修復(fù)功效評價中，細(xì)胞劃痕實驗可以模擬皮膚受損后的自然愈合過程，用于觀察化妝品等外源因素對細(xì)胞遷移、修復(fù)和相互作用的影響。

　　中科檢測可開展細(xì)胞劃痕實驗，評估化妝品成分或產(chǎn)品對促進(jìn)皮膚修復(fù)和愈合效果，出具的化妝品修復(fù)功效評價報告具有CMA資質(zhì)。

　　細(xì)胞劃痕實驗應(yīng)用方向

　　遷移能力：實驗中細(xì)胞遷移填充劃痕區(qū)域的速度可以作為評估化妝品促進(jìn)皮膚愈合的一個指標(biāo)。在實驗中表現(xiàn)出強(qiáng)遷移能力的化妝品成分，可能在實際應(yīng)用中有助于加快皮膚受損區(qū)域的修復(fù)。

　　增殖效果：細(xì)胞在劃痕區(qū)域的增殖情況反映了化妝品促進(jìn)皮膚細(xì)胞再生的潛力。增殖效果好的化妝品可能在實際使用中有助于皮膚恢復(fù)活力和彈性。

　　安全性評估：通過細(xì)胞劃痕實驗可以初步評估化妝品成分的安全性。如果在細(xì)胞水平上沒有表現(xiàn)出毒性或負(fù)面影響，這為進(jìn)一步的體內(nèi)測試和人體試驗提供了基礎(chǔ)。

　　劑量效應(yīng)關(guān)系：實驗中可以測試不同濃度的化妝品成分，以確定有效劑量和安全劑量范圍，這有助于指導(dǎo)產(chǎn)品配方的開發(fā)。

　　長期效果預(yù)測：雖然細(xì)胞劃痕實驗是短期的，但它可以為預(yù)測長期皮膚修復(fù)效果提供一定的依據(jù)。例如，能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞遷移和增殖的成分，可能在實際使用中有助于減少疤痕形成。

　　臨床試驗：細(xì)胞劃痕實驗的結(jié)果需要通過臨床試驗來驗證。臨床試驗可以在實際皮膚上評估化妝品的效果，包括愈合時間、皮膚質(zhì)地改善和整體修復(fù)效果。

　　綜合評估：細(xì)胞劃痕實驗只是評估化妝品修復(fù)功效的多種方法之一。它的結(jié)果需要與分子水平的研究、動物模型實驗以及其他體外實驗結(jié)果相結(jié)合，以全面評價化妝品的功效。

　　細(xì)胞劃痕實驗原理

　　細(xì)胞劃痕實驗是通過在細(xì)胞單層上劃痕并通過延時顯微鏡定期捕獲圖像，從而研究細(xì)胞遷移運動、修復(fù)能力和細(xì)胞間相互作用的實驗室技術(shù)，基本原理是：在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口”，劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕/傷口”愈合，于細(xì)胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像，通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值，可對細(xì)胞的遷移能力做出判斷。

　　細(xì)胞劃痕實驗步驟

　　1、準(zhǔn)備

　　所有能滅菌的器械都要滅菌，包括直尺(或者24孔板蓋)和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內(nèi))。

　　2、流程

　　1)鋪板：將細(xì)胞消化后加入培養(yǎng)基終止消化，將細(xì)胞吹打均勻，然后按比例鋪板。如果不均勻可以用手掌對著一橫邊和一縱邊輕輕拍打，切忌四個邊都拍打，這樣細(xì)胞很容易聚到中間。

　　2)掌握細(xì)胞狀態(tài)，過夜能長滿為佳。

　　3)第二天用黃槍頭比著直尺(或者槍頭，板蓋)，垂直在原來的培養(yǎng)基里劃痕，每孔1道(也可多劃幾道，參考細(xì)胞狀態(tài))，槍頭要垂直，不能傾斜。

　　4)用PBS清洗細(xì)胞1-2次，去除劃下的細(xì)胞，加入低血清培養(yǎng)基(或者培養(yǎng)基)；然后去顯微鏡下拍照，盡量高倍鏡低倍鏡都拍照，可以事先在板子底部用Marker筆畫上小圓圈標(biāo)記來保證能拍到同一個點，作好記錄。

　　5)加藥，放入37度5%CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時間依照實驗要求進(jìn)行，通常以12h、24h、48h為準(zhǔn)。按所需時間節(jié)點安排取樣拍照時間。

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